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在抗體類產(chǎn)品的生產(chǎn)純化過程中,Protein A 親和層析樹脂是分離和純化抗體常用的工具。但在抗體純化過程中 Protein A 會脫落致使抗體類產(chǎn)品中含有Protein A,從而影響產(chǎn)品的純度和效價,給制藥業(yè)帶來重大問題,例如中國藥典2015年版規(guī)定尼妥珠單抗注射液用酶聯(lián)免疫法檢測出的蛋白質 A 的殘留量應不高于蛋白總量的0.01%,故必須對生物制品中的Protein A 進行檢測。
Protein A包括天然Protein A、重組Protein A 以及結構與天然Protein A 有顯著區(qū)別的耐堿性重組Protein A,如 GE 公司的MabSelect SuReTM Protein A。依科賽的EH063試劑盒可對脫落的天然Protein A、重組Protein A 進行定量檢測。如果您需要檢測耐堿性重組Protein A,請選擇我們的EH064試劑盒。即使樣品中含有抗體,也可經(jīng)過有效的處理檢測出抗體中微量的Protein A。
檢測原理:
本實驗采用雙抗體夾心ELISA法??筆rotein A 抗體已包被于酶標板上。加入樣本、標準品,樣本、標準品中的Protein A與包被于酶標板上的抗Protein A結合,形成免疫復合物,通過洗板,游離的成分被洗去;加入HRP標記的抗Protein A 抗體,標記了HRP的抗Protein A 抗體會與結合于酶標板上的標準品或樣本中Protein A結合,形成免疫復合物,通過洗板,游離的成分被洗去。加入顯色底物(顯色劑),若反應孔中有Protein A,辣根過氧化物酶會使無色的顯色劑變藍,加終止液變黃。在450nm 處測OD值,Protein A 濃度與OD450值之間呈正相關,可通過繪制標準曲線求出標本中Protein A 濃度。